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昆明狼犬血液生理生化常值、血液
2010/9/16 16:27:56
关键字：鉴定材料之四
昆明狼犬的育成，引起了国内有关部门和学术界的极大关注。为了更好地揭示昆明狼犬的一峡生物学特性，加强本品种的选育工作，我们对昆明狼犬的一些生理生化常值、血液氨旅酸含量及血清中无机元素进行了测定，所得数据按生物统计方法处理，并与德国牧羊犬（简称牧羊犬）的相应正常值进行比较分析，探讨其差异性。
材料和方法
血样采自云南省军区军犬训练队犬群，被测犬营养状况均在中等或中等以上，健康，无临床症状者，共43只。其中昆明狼种犬公20只，母15只；德国牧羊犬公5只，母3只，年龄1--7岁。
采血于上午空腹时进行，由前后肢静脉采取血样15毫升。依测定项目不同，分别制备全血清及无蛋自滤液样品。
测定方法（1.2.3.）
1、体温：用校准的兽用水银体温计直肠测温3分钟。
2、呼吸数：在安静状态下，识听诊器听取呼吸数，记录1分钟。
3．心率数：在安静状态下，记录1分钟的脉搏数。
4、红、白细胞计数：用红、白细胞吸管迸行血样稀释，然后以改良纽巴氏计数板进行直按计数。
5、白细胞分数计数：瑞氏染色法，布片分类计数100个自细胞。
6、红细胞压积：温氏法。
7、血红蛋白含量：沙利氏比色法。
8、红细饱沉降率测定：用魏氏血沉管，采用直立法，记录15分、30、60分的血沉数值。
9、血液凝固时间测定：毛细玻管测定法。
10、血小板计数：直接计数法。
11、血液非蛋白氮测定：微最消化定氮法。
12、血洁总蛋白测定：微量消化定氮法。
13、血液葡萄糖测定：邻甲苯胺法。
14、血清总脂测定：香草醛显色法。
15、血清蛋白电泳：醋酸纤维薄膜法。用日本岛津CS—930型双光京薄层扫描仪进行扫描后，得出各蛋白质区带的百分含量，再用各区带电泳值乘以该头犬的血清总蛋白会含量，即得各部分蛋白含量。
16、血液中游离氨基酸含量和血清中蛋白氨基酸含量：用日立835—50型氨基酸自动分析仪测定。
（1）血清中游离氨旅酸分析方法：取抗凝血IMI。加入10%三氯醋酸9MI混匀过滤。取无蛋白滤液IMI水浴蒸干（加去离子水反复蒸干三次），加入0、02N盐酸IMI浴解，取溶解液500UI上机作标准分析法分析。
（2）血清蛋白水解氯基酸分析方法：取0、5MI血清，加入6MI，于真空状态下110C水解24小时，水浴蒸干（加去离子水反复蒸干三次），加入0、02N氢氧化钠IMI氧化4小时，用0、IN盐酸中和，最后用0、02N盐酸稀释至100倍，取500UI上机作标准分析法分析
（3）分析条件：日立835—50型氨基酸自动分析仪的进样量为50UI，分离柱温53℃。泵流量：缓冲液0、225M/分，茚三酮0，275M/分。泵压：缓冲液80一120K/CM，茚三酮115—30K/CM。检测波长570HM、440HM。每个样品分析72分钟。
17、血清中无机元素分析：用电感耦合等离子体光谱仪（PS—4美国页尔德）分析。 对所测得的数据进行生物统计分析，求出平均数(X)、标准差(S),标准误(S)、变异系数（C、V％），变动范围（数据的上限和下限）、品种和公、母之间用T检验法，求其显著性（P）值。
结果
对成年昆明狼犬生理生化常值、血液氨基酸含量及血清中无机元素测定结果分别列表如下：（见表1一5）：
讨 论
生理生化常值是检验品种犬不可缺少的微观数据。影响各项检验值的客观因素甚多，诸如：测定方法，检测手段，犬的健康状况，性别与年龄，饲养管理，营养条件等。本文的检测数据与国内外文献报告[4、5、6、7、8、9]数值接近，有些项目显示出一定的差异，但仍在正常值波动范围内。
一、血液生理生化常值
1、公、母昆明狼犬血液生理常值差异性比较（见表6）看出，除淋巴细胞公犬高于母犬，
差异显著（P＜0.05），其他项目均无差异。
2、公、母昆明狼犬血液生化常值差异性比较（见表7）显示，血清总脂母犬高于公犬，差异非常显著（P＜0.01），其他项目均无差异。
3、昆明狼犬与牧羊犬血液生理常值差异性比较（见表8）看出，心率、血红蛋白量、白细胞总数、嗜中性白[细胞昆明狼犬高于牧羊犬，两者差异非常显著（P＜0.01或P＜0.001）这表明，昆明狼犬代谢机能旺盛，血液循环功能较好，抗病力强于牧羊犬。嗜酸性白细胞，牧羊狼犬高于昆明狼犬差异非常显著（P＜0.01），但仍在正常值范围内]。
4、昆明狼犬与牧羊犬血液生化常值进行差异性比较（见表9），其中，血液非计蛋氮、血清总蛋白、血清白计蛋量，牧羊犬高于昆明狼犬，差异非常显著（P＜0.01或P＜0.001），这表明牧羊犬的蛋白质和核酸代谢以及蛋白质营养水平强于昆明狼犬。
5、昆明狼犬血液中的B—球蛋白量高于牧羊犬，差异显著（P＜0.05或P＜0.001）。众所周知，犬只经过免疫后，血液中的α、β和γ—球蛋白都含有抗体，因而使机体具有免疫性，β—球蛋白含量高，对疾病的抵抗力较强。β—球蛋白的另一重要生理功能就是与血液中的铁离子结合成运铁蛋白，使血液中的铁被运输。因此，昆明狼犬血液中铁的转运能力强于牧羊犬。
二、血液无机元素
1、公、母昆明狼犬血液中无机元素差异性比较（见表10）看出，公犬血液中硒的含量高于母犬（P＜0.05），差异显著，其原因可能是终犬在怀孕和泌乳期消耗多，使母犬血液中粞量降低，造成公、母犬血液中硒含量的差异。因此，在母犬怀孕和泌乳期应适当提高硒的给予量。
2、从昆明狼犬与牧羊犬血液中无机元素差异性比较（见表11）中看出，两品种犬血液中主要的无机元素差异不大，其原因在于两品种犬所处地区生态环境和营养水平相近所致。
三、血液氨基酸含量
氨基酸是构成蛋白质的主要成分。机体内的全部蛋白质（包括酶、激素、抗体等）都是在细胞内利用氨基酸合成的，所合成的蛋白质无论在化学结构上和生理功能上都有巨大差别。这些差别都是由细胞内的遗传物质，特别是核内脱氧核糖核酸分子中碱基编码决定的，并具有种属特性。若肌体内缺乏氨基酸会直接影响生物合成蛋白质，蛋白质缺乏会引起犬生长迟缓、生理机能减退和对疾病抵抗力的降低。因此，测定血液中氨基酸的含量和分布具有十分重要的意义。
1、用日立835—50型氨基酸自动分析仪，测定了35头昆明狼犬和8头牧羊犬犬中的氨基酸含量。结果表明，昆明狼犬血液中有17种游离氨基酸（色氨酸未测），其中谷氨酸含量最高（5.710Mg/100MI），丙氨酸（4.070Mg/10MI）和精氨酸（3.452Mg/100MI），次之，慢氨酸（0.089Mg/100MI）最低，氨基酸总量为39.993Mg/100MI，必需氨基酸量为15.872Mg/100MI，非必需氨基酸量为24.121Mg/100MI，必需氨基酸与非必需氨基酸比值为0.66（见表3）。
昆明狼犬血清中蛋白质经酸水解后，亦有17种按基酸，其中谷氨基酸含量最高（826.92IM/100MI），亮氨酸（602.508Mg/100MI）和天冬氨酸含量（520.888Wg/MI）次之，蛋氨酸（56.717Mg/100MI）最低，血清中蛋白氨基酸总量为5728.980Mg/MI）必需氨基酸量为258.789Mg/100MI，非必需氨基酸量为3143.191Mg/100MI，必需氨基酸与非必需氨基酸比值为0.82（见表4）。
2、从昆明狼犬与牧羊犬血液中游离氨基酸的差异比较（见表14）看出，天冬、谷、甘、异、亮、苯丙、赖、脯氨酸的含量牧羊犬高于昆明狼犬（P＜0.01或P ＜0.001），差异非常显著。亮、精氨酸的含量昆明狼犬高于牧羊犬（P＜0.01），差异非常显著。苏、蛋按酸的含量牧羊犬（P＜0.05），差异显著。丙氨酸和氨的含量昆明狼犬高于牧羊犬（P＜0.05或P＜0.01），差异显著或非常显著。
3、昆明狼犬与牧羊犬血清中蛋白按基酸的差异比较（见表15）看出，天冬、谷、甘、胱、蛋、异亮、酪、苯丙、赖、组、精、脯氨酸的含量牧羊犬高于昆明狼犬，差异非常显著（P＜0.01或P＜0.001）。缬、亮氨酸和氨的含量昆明狼犬高于牧羊犬，差异非常显著（P＜0.01或 P＜0.001）。
4、由于生物体的蛋白质具有种属特异性，各种氨基酸的含量与比值也是不同的。通过昆明狼犬与牧羊犬血液中各种氨基酸的差异性比较看出，17种游离氨基酸中有12种达到差异显著或非常显著的水准：17种蛋白氨基酸中有14种达到非常显著的水准。
结论
通过对昆明琅犬与德国牧羊大血液生理、生化值，无机元素和氨基酸含量值的显著性测验表明：昆明狼犬与德国牧羊犬在血缘关系上是不同的。因此，可以认为，昆明狼犬是一个独立的犬品种
